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茯茶产地加工与炮制一体化药学研究

时间:2018-06-29 08:01来源:硕士论文作者:lgg 点击:
本文是一篇药学论文,药学是历代人民大众智慧的结晶,它对全人类的健康发展,种族繁衍与发展,有着巨大贡献。中医药学源远流长,是中华民族优秀文化遗产中的珍宝,是现代国际交流中我
本文是一篇药学论文,药学是历代人民大众智慧的结晶,它对全人类的健康发展,种族繁衍与发展,有着巨大贡献。中医药学源远流长,是中华民族优秀文化遗产中的珍宝,是现代国际交流中我国独具特色的优势之一。(以上内容来自百度百科)今天为大家推荐一篇药学论文,供大家参考。
 
前 言
 
茯苓为多孔菌科真菌茯苓 Poria cocos (Schw.) Wolf 的干燥菌核,是我国最早发现并利用的一种大型野生真菌,始载于《神农本草经》[1]。主要分布于我国东、中、南部广大山区,云南、湖北、安徽、河南、四川等省份的山区均有栽培,其中安徽产量及销量均为全国最大[2]。茯苓性味甘、淡、平,具有利水渗湿、促脾宁心的功效,临床用于治疗小便不利、痰饮眩悸、脾虚少食、便溏泄泻、神心不宁等[3-4]。茯苓被称誉为中药“四君八珍”之一,在中药复方中,如桂枝茯苓汤、四君子汤及茯苓散等方剂中均有茯苓的应用,故又有“十方九苓”之美誉。茯苓采收时间大多为 7-9 月份或第二年的 3-4 月份,以“发汗”处置,然后晾干,根据加工方法和部位不同有茯苓片、茯苓块、茯苓个、茯神块等。茯苓化学成分以茯苓多糖及四环三萜类化合物为主要生物活性成分。其中茯苓多糖含量约占茯苓总含量的 90%以上,在具有抗肿瘤、抗炎、抗衰老及抗过敏等多方面呈现出较好的药理效应[5-8]。安徽省金寨县、岳西县、霍山县等地,自宋代就有栽培茯苓的历史。栽培的茯苓以“光、洁、细、白”在全国乃至东南亚均享有很高的知名度。大别山腹地位居独特的自然环境(海拔高,昼夜温差大,雨量充沛等)为茯苓的生长提供了适宜的条件,加之丰富的松树资源,为茯苓药材可持续栽培提供了可能,根据文献报道与年报统计,全国茯苓需求量有一半来自安徽。茯苓作为大宗药材,其栽培技术经人们不懈努力现以臻完备,规模种植已达到产量稳定。但长期以来,茯苓产地加工方法各个工序仍然依靠手工去皮、手工切制、日晒干燥等原始方法,设备简陋,以作坊式加工为主,未能形成产业化加工模式,致使茯苓饮片品质出现不稳定的情况。同时,茯苓饮片质量优劣评价仍以商品外观性状、颜色、质地等传统指标为主,缺少内在化学成分、农药残留、有害重金属及微生物污染等指标来控制其质量及安全性。本项目针对目前加工过程中存在的一些问题,总结原因为以下几点:1、茯苓加工目前大多仍依靠苓农长期累积的经验自营进行,多为分散式作坊加工,缺乏客观的技术参数,炮制工艺尚待规范;2、长久以来茯苓去皮、切制、干燥等过程仍凭借手工进行,产业化机械生产设备不完善。
根据 2015 年版《中国药典》记载及多地产地实际加工经验,归纳总结了目前茯苓主要的四种加工模式,1)鲜茯苓—去皮—切制—干燥;2)鲜茯苓—发汗—去皮—切制—干燥;3)鲜茯苓—蒸制—去皮—干燥;4)鲜茯苓—发汗—蒸制—去皮—干燥。上述模式的主要差异在于去皮方式的不同。茯苓片等在现有条件下均采用手工切制、日晒等传统工艺,效率低下,难以满足机械化大生产需求。茯苓丁虽采用机械切制,但碎屑率太高,对茯苓药材容易造成极大浪费。当前对茯苓加工炮制工艺的研究一般仍仅限于某一种加工方式,评价指标单一,对于碎屑率问题也很少有涉及。本课题组团队在前期深入研究了茯苓菌种制备技术并对加工工艺进行了初探,对茯苓工艺的研究仅限于茯苓多种加工模式中的一种—发汗去皮工艺,并未对其他的加工模式如趁鲜蒸制去皮、发汗蒸制去皮进行研究。在比较生茯苓与蒸制茯苓对内在质量的影响时,发现蒸制茯苓的内在成分含量比生茯苓的含量高,但并未对蒸制工艺进行系统的探究。因此,在前期实验室研究的基础上,结合茯苓饮片加工过程中的实际现状,项目在传统加工工艺研究的基础上,针对该药材直接趁鲜加工成饮片过程中各个加工环节,通过小试正交试验设计优选出最佳的茯苓片和茯苓丁的加工工艺,并将优选工艺经过中试实验,调整试验参数,制定出适合工业生产的工艺流程,并通过对水负荷模型大鼠利尿试验和大鼠脾虚模型健脾试验作用来探讨茯苓丁优选的新工艺和传统工艺对药效学的影响。同时建立以其饮片外观性状、茯苓多糖、总三萜、猪苓酸 C、去氢茯苓酸、茯苓酸、饮片成型率为指标的质量标准体系。本论文的重点是解决茯苓产地加工机械化大生产关键技术,规范苓农由分散加工逐步转变为集约化加工生产;同时建立稳定可控的质量标准体系来保证茯苓饮片的大规模规范化生产,进一步提高茯苓饮片的内在质量。
...........
 
第一章 茯苓质量评价体系的建立
 
茯苓药材及饮片的质量控制在 2015 年版《中国药典》仅限于水分、浸出物、总灰分的检测及薄层检识和显微鉴别等通用项外,并未收载茯苓化学成分含量测定内容,质量标准的评价指标较单一。故采用多指标、多成分含量测定,以更精确、更科学的方法综合评价茯苓质量更有意义。茯苓的化学成分较多,主要有多糖、三萜、树脂、蛋白质等,其中多糖、三萜是其主要活性物质[9]。其中茯苓多糖、总三萜类是茯苓发挥药理作用的主要有效成分,其均具有抗炎、抗肿瘤、抗衰老、增强免疫、保肝等作用[9-11]。文献中有关茯苓的含量测定,多是对茯苓多糖、总三萜、三萜类成分等进行测定。本研究考虑从总体上控制茯苓质量,拟以茯苓多糖、总三萜及猪苓酸 C、去氢茯苓酸、茯苓酸为评价指标,从多维度综合考察茯苓质量。
 
1 实验仪器及试药
紫外可见分光光度计-UV757CRT(上海精密科学仪器有限公司);CP225D 型-十万分之一电子天平(Sartorius 公司);EYELA N-1100旋转蒸发仪(Tokyo RikakikaiCo. Ltd)Milli-QAdvantage A10 一体式超纯水机(美国 Milipore 公司);HH-4 型数显恒温水浴锅(金坛市晶玻实验仪器厂);AS5150A 型超声清洗仪(Autoscience公司);DFY-300(摇摆式)多功能高速中药粉碎机(温州顶力医疗器械有限公司);岛津 LC20A 高效液相色谱仪:Shimadzu LC-16C 型高效液相色谱仪(SPD-16 紫外检测器、岛津 CTO-16 型柱温箱、LC-16C 泵);万用电炉(上海科恒);DHG-9140型电热恒温鼓风干燥箱(上海市三发科学仪器有限公司)。
........
 
2 茯苓多糖测定方法的研究
 
2.1 对照品溶液的制备
精密称取 105℃下干燥至恒重的葡萄糖标准品 10.01 mg,用重蒸馏水溶解并定容置 100 mL 的容量瓶中,得到葡萄糖标准品贮备液 0.1001 mg·mL-1。
 
2.2 供试品溶液的制
称取(60℃烘干)茯苓样品粉末 4.00 g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,按正交设计的因素表,加入重蒸馏水浸泡 30 min 进行回流提取,过滤,滤液浓缩至原体积的 1/12 倍,放冷后加入乙醇,使浓缩液中乙醇浓度达到一定的浓度后,在冰箱中静置,过滤,用 80%乙醇冲洗滤饼,减压干燥,称定重量。
 
2.3 供试品溶液的测定
精密称定“2.2”项下制备的茯苓粗多糖,置于 50 mL 容量瓶中,用重蒸馏水定容至刻度,即得茯苓饮片粗多糖样品溶液。精密吸取茯苓饮片多糖样品溶液0.3mL 于试管中,加入 0.7mL 蒸馏水,加入 0.2%蒽酮—浓硫酸溶液 4 mL,摇匀后,水浴显色 10 min,取出迅速冷却至室温后,于波长 583 nm 处进行吸光度测定。
........
 
3 茯苓总三萜测定方法的研究............22
3.1 对照品溶液的制备..........22
3.2 供试品溶液的制备..........23
3.3 最大吸收波长的确定..... 23
3.4 线性关系考察........24
3.5 提取条件的考察....26
3.6 提取工艺响应面法试验........... 30
4 HPLC 法同时测定猪苓酸 C、去氢茯苓酸、茯苓酸含量方法的建立.............33
4.1 对照品溶液的制备..........33
4.2 样品溶液的制备....34
4.3 方法学考察............34
4.4 色谱条件的考察....40
4.5 提取方法的考察....41
5 外观性状评分标准........43
 
4 HPLC 法同时测定猪苓酸 C、去氢茯苓酸、茯苓酸含量方法的建立
 
2015 年版《中国药典》并未收载采用 HPLC 法测定茯苓相关成分的内容,文献多是从茯苓多糖、总三萜及三萜类成分进行测定。三萜类成分有猪苓酸 C、去氢茯苓酸、茯苓酸、15α-去氢土莫酸、去氢依布里酸、24-三烯-21-酸等,具有抗肿瘤、抗衰老、抗炎、保肝、增强免疫等作用[17-20],其中猪苓酸 C、去氢茯苓酸和茯苓酸含量相对较高,化学性质稳定,具有显著的药理活性。因此将猪苓酸 C、去氢茯苓酸、茯苓酸作为定量指标。
 
4.1 对照品溶液的制备
精密称定 105℃下干燥至恒重的猪苓酸 C 对照品 5.12mg、去氢茯苓酸对照品7.28mg、茯苓酸对照品 4.06mg,分别置于 10 mL 容量瓶中,用色谱甲醇定容至刻度,制备成对照品储备液。分别精密移取储备液 0.1mL、0.3mL、1.0mL 至 10mL量瓶中,以色谱甲醇稀释至刻度,摇匀,制成对照品混合溶液。精密称定过 80 目筛的茯苓粉末(于 60℃下烘干)2.00 g,置于具塞锥形瓶中,加入甲醇 20 mL,称定重量,提取温度为 45℃,超声(功率 300W,频率 50 MHz)30 min,放冷后,用甲醇补充重量,过滤,取续滤液,以 0.25μm 微孔滤膜滤过,即得供试品溶液。
..........
 
结 语
 
本课题通过对茯苓产地加工的调研、市售茯苓饮片内在质量的分析及市售茯苓饮片指纹图谱研究,发现茯苓加工工艺各不相同,茯苓饮片外观差别较大、质量良莠不齐。在结合临床应用及文献研究的基础上,以多指标质量评价体系,优选出目前茯苓加工采用的四种加工方式中最佳的茯苓片、茯苓丁的加工工艺。通过中试试验,茯苓片、茯苓丁工艺指纹图谱研究验证工艺的可行性、稳定性。本课题取得了与其的研究成果,论文的创先性有以下几点:
1. 首次对茯苓饮片混乱的加工方式(鲜茯苓—去皮—切制—干燥;鲜茯苓—发汗—去皮—切制—干燥;鲜茯苓—蒸制—去皮—干燥;鲜茯苓—发汗—蒸制—去皮—干燥)进行系统研究并确定最佳的加工工艺,建立了茯苓饮片产业化生产关键技术操作规程,规范了茯苓饮片的加工工艺,解决了苓农由分散加工引起的茯苓饮片质量参差不齐的问题。
2. 初步建立茯苓产地加工与炮制一体化产业化生产模式,且初次在产业化加工过程中运用茯苓切片机,提高了生产效率,提高了饮片的成型率,规范了茯苓饮片产业化生产关键技术参数,确保了茯苓饮片质量的稳定。
3. 首次运用指纹图谱和系统聚类分析,对优选的工艺进行稳定性考察, 再次验证了优选工艺的稳定性、可控性。
4. 建立了以茯苓饮片的成型率、饮片外观性状、茯苓总多糖、总三萜、猪苓酸 C、去氢茯苓酸、茯苓酸的含量为指标的多指标综合质量控制系统。
5. 建立了水负荷模型大鼠利尿试验和大鼠脾虚模型健脾试验,首次结合药效学研究,从临床应用方面评价茯苓饮片的加工工艺。
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参考文献(略)
(责任编辑:gufeng)
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